Weefsel inbedden in kunststof, Technovit 7100
In de meeste histologische laboratoria is de paraffine-inbedding gebruikelijk. In bepaalde gevallen is het echter wenselijk om weefsel in kunststof te gieten. Zo kan met een kunststoftechniek een veel dunnere coupe gesneden worden en daardoor wordt een veel betere morfologie bereikt. Kunststoffen voor de histologie zijn er in drie vormen: GMA (glycol methacrylate) ,MMA (methyl methacrylate) en epoxy. De GMA, zoals Technovit, is een relatief zacht soort kunststof waarmee een snededikte tussen de 0,5-1µm bereikt kan worden. Deze coupes worden ook wel de semidunne coupes genoemd. GMA kan op een rotatiemicrotoom of een ultramicrotoom gesneden worden met stalen-, glazen- of diamanten messen. Van de stalen messen kunnen alleen de 'D' profiel messen gebruikt worden.
Het MMA kunststof, zoals Araldit en LR White, is harder en kan daarom nog dunner gesneden worden (50-70nm). De MMA kunststoffen worden uitsluitend met glazen- of diamanten messen gesneden op een ultramicrotoom. Een epoxy is b.v. Epon. Epon is hard en weefsel welke secundair gefixeerd is met osmium tetroxide kan probleemloos worden ingegoten. Deze coupes worden vervaardigd voor de electronemicroscopie.
Enkele voor- en nadelen van paraffine ten opzichte van kunststof staan in onderstaande tabel,
Paraffine | Kunststof |
standaard in de histologie | wordt minder vaak toegepast |
vrij snelle bewerkingstijd en eenvoudig in gebruik | vergt veel tijd en er moet heel nauwkeurig gewerkt worden |
grote coupes mogelijk | uitsluitend kleine coupes mogelijk |
vele kleuringen toepasbaar | weinig kleuringen te gebruiken |
kan gesneden worden met goedkope wegwerpmesjes | messen zijn kostbaar |
coupedikte beperkt tot 2- | coupedikte bereikbaar tussen 50nm en 1µm |
door de grote krimp meestal veel artefacten in coupe | weinig krimp, zeer goede morfologie |
kan op een eenvoudig rotatie- | GMA moet minimaal op een rotatiemicrotoom met retractie gesneden worden, MMA moet op een ultramicrotoom gesneden worden |
harde weefsels zijn moeilijk te snijden | harde weefsels zijn goed te snijden |
De firma Kulzer uit Duitsland heeft een GMA kunststof, Technovit 7100, in haar programma die voor een hobby-histoloog goed te gebruiken is. Een Broschure van Kulzer uit 2011 kan in 'Downloads' gedownload worden. Deze kunststof kan worden besteld bij b.v. Morphisto in Duitsland: https://www.morphisto.de/en/shop/detail/d/TECHNOVIT%C2%AE_7100//11823/
Onderstaand inbeddingsprotocol is gebaseerd op het inbedden van weefsel met Technovit 7100.
| |
Het is aan te raden om verbruiksmaterialen te nemen die vervaardigd zijn van glas. Dit om vervuiling van het Technovit te minimaliseren. | |
Gebruik van glazen pasteurpipetten om Technovit met harder II in de gietmal aan te brengen. Om de Technovit 3040 aan te brengen is het handig om een pipet te ontdoen van de smalle uitstroomopening en zo te gebruiken. | |
15 delen infiltratie- | |
Een verstelbare micropipet van b.v. 200- | |
Technovit 7100, zakjes van 1gram harder I en 100ml harder II. | |
De gietprocedure met Technovit 3040 in beeld. | |
Technovit 3040 poeder en Technovit standaard. | |
Vijf verschillende stukjes weefsel liggen in Technovit te polymeriseren. | |
Het Technovit 3040 is in de omgekeerde blokhouders gegoten. Het gepolymeriseerde technovit met weefsel wordt hiermee stijf verbonden met de blokhouders. | |
Na ongeveer 15 minuten kunnen de blokken uit de gietmal gewrikt worden. Ik noem wrikken omdat de blokken redelijk vast in de mal kunnen zitten. Doordat de gietvormen licht taps verlopen wordt het uitnemen vereenvoudigd. |