Hoofdmenu
Download deze pagina als .pdf , klik hier
Bronvermelding:
1 Theorie: Junqueira L.C. en Carneiro J. (2004, tiende druk), Functionele histologie, Maarssen. Uitgeverij Elsevier. Hoofdstuk 2, pag. 31-
2 Wikipedia, de vrije encyclopedie, http://nl.wikipedia.org/wiki/Hoofdpagina.
3 Stainsfile , the internet resource for histotechnologists
Inleiding
Bij ‘normale’ histologische kleuringen worden kleurstofmoleculen meer of minder gebonden aan weefsel-
Met enzym-
In de Immunohistochemie worden celcomponenten (antigenen²) aangetoond met antilichamen.
In-
De meeste van de histochemische bewerkingen is voor de hobby-
Histochemische reacties en kleuringen kunnen echter wel redelijk eenvoudig en zonder veel kostbare apparatuur en materialen uitgevoerd worden.
Doel van dit preparaat is het aantonen van polysachariden in de goblet cells (slijmbeker-
De reactie is gebaseerd op de oxidatieve werking van perjoodzuur (HIO4) op de 1,2-
De ontstane aldehyde²groepen reageren vervolgens met het reagens van Schiff, tot een onoplosbaar complex met paarsrode kleur¹.Het reagens kan kant en klaar gekocht worden maar heeft een vrij korte levensduur (≈ 1jaar afhankelijk van temperatuur en hoeveelheid licht). Beter is het om steeds een kleine hoeveelheid zelf aan te maken. Dit kan vrij eenvoudig en is hier beschreven.
Voor dit preparaat is een stukje Jejunum geprepareed in paraffine. Tevens is een stukje colon (dikke darm) geprepareerd in Technovit om te kijken of de daar aanwezige slijmbekercellen ook PAS positief reageren. Ter orientatie is rechts een overzicht van een stukje jejunum in een HE kleuring geplaatst. Klik op de afbeelding voor een vergroting.
1 = darmlumen;
2 = kerckring plooien (plicae circulares);
3 = darmvlokken (villi) met crypten (pijlen) en darmvlokken (pijlpunten);
4 = submucosa;
5 = muscularis mucosae met glad spierweefsel;
6 = bloedvaten.
Het gevolgde PAS kleurprotocol stamt uit (Stainsfile , the internet resource for histotechnologists ³):
Paraffinecoupes door hydratie in waterige omgeving brengen;
Oxideren in perjoodzuur (1%), 25min;
Spoelen in leidingwater;
Spoelen in Aqua dest (AD);
Schiff's reagens aanbrengen en 25 laten inwerken;
Spoelen AD;
Spoelen in leidingwater (deze stap vesterkt de paar/purpere kleuring);
Tegenkleuren met haematoxyline (met haematoxyline wordt normaal ≈5min gekleurd maar hier niet langer dan 2-
Spoelen AD;
Blauwen in leidingwater;
Spoelen AD;
Dehydrateren en indekken met b.v. Depex.
Uit de opnamen zal blijken dat: Slijmbekercellen in het jejunum en colon van een muis zijn PAS positief.
Klik op de afbeeldingen voor een vergroting.