Reagens van 'Schiff' vervaardigen - De wereld onder de microscoop

Ga naar de inhoud

Hoofdmenu

Reagens van 'Schiff' vervaardigen

Materialen > Histologische kleurstoffen
 

Bronvermelding:
1 Prof. Dr. Peter Böck (2010, 18., Auflage), Romeis Mikroskopische Technik, München. Verleger: Spektrum Akademischer verlag. Hoofdstuk 3, "Färbemethoden", pagina 243

Het reagens van Schiff wordt gebruikt in bijvoorbeeld de 'Feulgen-reactie' of in de 'PAS' kleuring. Beide zijn histochemische kleuringen. In de Feulgen-reactie wordt DNA aangekleurd en in de PAS (Periodic- Acid-Schiff) kleuring wordt glycogeen en andere polysachariden (koolhydraten). Het reagens kan kant en klaar gekocht worden maar is snel onderhevig aan verval en het is vrij duur.
Voor een groot laboratorium allemaal minder interessant, voor de hobby-histoloog natuurlijk van groot belang. Wanneer de vaste stoffen éénmaal zijn aangeschaft kan op elk moment een gewenste hoeveelheid worden aangemaakt.
De bewaartermijn kan sterk worden verhoogd door de kleurstof koel, donker en in een bruine fles op te slaan. Wanneer de oplossing roodachtig is geworden is het niet meer bruikbaar.

Het recept voor 100ml reagens¹:

Oplossing A: 0,5gr pararosaline (artikel 1B-297 bij chroma.de) oplossen in 15ml HCL 1N (een 1N oplossing bevat 36,453gr zoutzuur per liter en komt daarom ongeveer overeen met een waarde van 3,55%). Bij een HCL oplossing van 25% geeft een verdunning van 1ml HCL + 7ml AD een percentage van 3,57%. Let op! het zuur bij water voegen en niet omgekeerd.
Oplossing B: 0,5gr kaliummetabisulfiet (K2S2O5) oplossen in 85ml AD.








Oplossing A en B vermengen en 24 uur in het donker laten rijpen (de roodbruine kleur wordt langzaam wat geliger).





1 Tablet 'Norit' in een vijzel verpulveren en 0,3gr afwegen.





Op een magneetroerder de afgewogen actieve kool aan de oplossing toevoegen (oplossing niet verwarmen).





Op een magneetroerder de afgewogen actieve kool aan de oplossing toevoegen en goed vermengen (oplossing niet verwarmen).





De oplossing filtreren.





Het reagens van Schiff is nu nog rosa van kleur maar zal na enige uren geheel blank van kleur zijn geworden.





Het reagens van Schiff uitgieten in een donkerbruine fles.





De fles altijd voorzien van een sticker met de naam van de stof en een aanmaakdatum.






Het recept zoals beschreven in 'Romeis 18'.

Kijk in preparaten om een PAS kleuring van slijmbekercellen te bekijken.

 
Terug naar de inhoud | Terug naar het hoofdmenu