Histologische kleurstoffen 2 - De wereld onder de microscoop

Ga naar de inhoud

Hoofdmenu

Histologische kleurstoffen 2

Materialen > Histologische kleurstoffen
 

Bronvermelding:
1 Prof. Dr. Peter Böck (1989, 17., neubearbeitete  auflage), Romeis Mikroskopische Technik, München. Verleger Urban & Schwarzenberg.
2 Lösungs- und Herstellungsvorschriften für Mikroskopische Farbstoffe, Waldeck GmbH & Co., 48161 Münster/Germany, Havixbeckerstrasse 62, zie
www.chroma.de
3 Artikelnummer uit de catalogus van de Firma Chroma in Münster (Duitsland), zie www.chroma.de
4 Armin Eisner,  kleurstofchemie specialist, zie
www.aeisner.de/index.html



1. Anilineblauw-Orange  G (volgens Heidenhain o.a. voor AZAN)²

- 2,5gr Anilineblauw-Orange G (1A-352³) verwarmen en oplossen in 100ml AD;
- in de hete oplossing 8ml ijsazijn 98% toevoegen;
- na afkoeling de  oplossing filtreren.


2. Anilineblauw-Orange G (volgens Heidenhain o.a. voor AZAN)¹

- 0,5gr Anilineblauw (oplosbaar in water, 1B-501³) en 2gr orange G (1B-221³) oplossen in  100ml AD;
- 8ml IJsazijn toevoegen;
- oplossing koken en na afkoeling filtreren;
- deze stamoplossing voor het kleuren verdunnen 1:1 tot 1:3 met AD.


3. Anilineblauw-Orange G (volgens Mallory)²

- 4,5gr Anilineblauw-Orange G (1A-550³) in 100ml AD door koken oplossen;
- na afkoeling de oplossing filtreren.


4. Anilineblauw-Orange G (volgens Mallory)¹

- 0,5gr Anilineblauw  (oplosbaar in water, 1B-501³) en 2gr Orange G (1B-221³) oplossen in 100ml AD;
- 1gr Fosforwolfraamzuur (3D-092³) toevoegen;
- filtreren.


5. Azur-Eosine (Giemsa²)   

- 0,76gr Azur-Eosine (1A-174³) oplossen in 50ml methylalcohol (3E-158³)en 50ml glycerine (3D-086³) bij 60°C;
- Methylalcohol en glycerine moeten  absoluut zuur- en watervrij zijn;
- na afkoeling de oplossing in absoluut droge fles filtreren.


6. Barlow's trichroom²

- 1,55gr Barlow's trichroom (1A-522³) in 60ml AD door koken oplossen;
- 0,25ml geconcentreerde salpeterzuur (3L-053³) toevoegen;
- na afkoelen 60ml glycerine (3D-086³) toevoegen en goed mengen.


7. Bismarckbruin¹

- 0,5gr Bismarckbruin (1B-261³) oplossen in 100ml methylalcohol van 30% (3E-158³);
- Filtreren (niet koken of verwarmen omdat anders de  kleurstof uiteen valt).


8. Boraxkarmijn²

- 4gr Boraxkarmijn (1A-434³) in 100ml AD door koken oplossen;
- 100ml Ethanol (3L-132³) toevoegen;
- na afkoeling  de oplossing filtreren.


9. Brilliantcresylblauw²  

A, stamoplossing;
- 0,85gr Natriumchloride mengen met 100ml AD en 7gr brilliantcresylblauw (1B-519³);
- mengen, niet verwarmen.

B, gebruiksoplossing;
- 10ml stamoplossing  mengen met 40ml NACL oplossing van 0,85%.


10. Karbolfuchsine¹ (Spermatozoön)

- 5gr Phenol  (3L-001³) oplossen in 84ml AD;
- 1gr New fuchsine (1B-467³) toevoegen;
- na mengen 10ml ethanol toevoegen.


11. Karbolfuchsine
² (Ziehl-Neelsen)

- 1,6gr Karbolfuchsine (1A-586³) onder verwarmen (niet koken) oplossen in 90ml AD en 10ml ethanol;
- na afkoeling filtreren.


12. Karbolgentiaanviolet ²(Gram kleuring)

- 0,6gr Karbolgentiaanviolet onder verwarmen (niet koken) oplossen in 95ml AD en 25ml ethanol;
- na afkoeling filtreren.


13. Karbol-Chromotrop  2R¹ (Cytologie, granula van eosinofiele granulocyten)  

- 1gr Phenol (3L-001³) in een kolf laten smelten in een heet waterbad;
- 0,5gr Chromotrop 2R (1B-259³) toevoegen en mengen met de gesmolten phenol;
- de oplossing mengen met 100ml AD;
- de kleurstof is 3 maanden houdbaar.


14. Karmaluin² (Kernkleuring na verzilveringstechnieken)

- 5,6gr Karmaluin (1A-334³) in 100ml  AD door koken oplossen;
- na afkoeling filtreren.


15. Karmijn volgens Best¹ (Glycogeen)

- 2gr Karmijn (5A-380³)  en 5gr kaliumchloride (3G-034³) onder verwarmen oplossen in 60ml AD;
- 1gr Kaliumcarbonaat (3G-033³) toevoegen en voorzichtig laten koken (schuimt sterk);
- enige minuten door laten koken. De kleur slaat daarbij om naar donkerrood;
- na afkoeling 20ml ammoniak (3L-136³) toevoegen;
- bewaren in goed gesloten fles in een koele ruimte. De kleurstof is ongeveer 2 maanden houdbaar.


16. Karmijn volgens Best² (Glycogeen)   

- 11,5gr Karmijn volgens Best (1A-358³) door koken oplossen in 100ml AD;
- na afkoelen 3ml ammoniak (3L-136³) toevoegen.


17. Karmijn-ijsazijn volgens Belling¹ (Chromosomen, uitstrijkpreparaat. Niet geschikt om te archiveren.)

- 100ml ijazijn van 45% aan de kook brengen;
- 0,5gr Karmijn  (5A-380³) toevoegen en oplossen;
- verder laten koken (1-2 minuten) totdat de kleur verandert en donkerder wordt;
- na afkoelen filtreren en in een donkere fles bewaren.


18. Karmijn-ijsazijn volgens Schneider² (Chromosomen, uitstrijkpreparaat. Niet geschikt om te archiveren.)

- 45ml IJsazijn (3D-087³) mengen met 55ml AD;
- 0,5gr  Karmijn (5A-176³) toevoegen en 30min laten koken;
- na afkoeling filtreren.


19. Kristalviolet²

- 2gr Kristalviolet (1B-345³) in 10ml ethanol en 90ml AD  oplossen door verwarmen (niet koken);
- na afkoeling filtreren.

20. Triacid volgens Ehrlich
¹  

- 3,4gr Methylgroen (1A-292³), 4,2gr fuchsine zuur (1B-525³) en 3gr orange G (1B-221³) in een vijzel vermalen;
- 100ml AD verwarmen tot 35°C en het mengsel hierin 2-3 dagen, onder geregeld  schudden, rijpen;
- na afkoeling filtreren.


21. Triacid volgens Ehrlich²

- 35ml Ethanol, 15ml glycerine (3D-086³) en 50ml AD verwarmen;
- 2gr Triacidpoeder (1A-572³) oplossen;
- na afkoeling filtreren.


22. Orceïne-ijsazijn volgens La Cour
¹ (Chromosomen, uitstrijkpreparaat of paraffinecoupes)

A, stamoplossing;
- 100ml IJsazijn verwarmen tot aan het kookpunt;
- 2,2gr Orceïne (1F-337³) oplossen en laten afkoelen.

B, gebruiksoplossing;
- 4,5ml stamoplossing met 5,5ml AD mengen en filtreren.


23. IJzerhaematoxyline  volgens Weigert¹  

A;
- 1gr Haematoxyline (5B-535³) oplossen in 100ml licht verwarmde ethanol 96%;
- 1 week laten rijpen. De oplossing is praktisch onbegrensd houdbaar.

B;
- 1,5gr IJzer (III) chloride  (3L-003³) oplossen in 100ml AD en 1ml geconcentreerde zoutzuur (3L-012³) toevoegen.

Vlak voor gebruik oplossing A en B mengen 1:1


24. IJzerhaematoxyline volgens Weigert²

A;
- 1gr Haematoxyline (5B-535³)  oplossen in 100ml licht verwarmde ethanol 96%;
- 1 week laten rijpen. De oplossing is praktisch onbegrensd houdbaar.

B;
- 4ml IJzer (III) chloride (3L-007³) oplossen in 95ml AD en 1ml geconcentreerde zoutzuur (3L-012³) toevoegen.

Vlak voor gebruik oplossing A en B mengen 1:1


25. IJzertrioxihaematine volgens Hansens²  

A;
- 10gr IJzer (III) ammoniumsulfaat (3G-095³) oplossen in 150ml verwarmde AD.

B;
- 1,6gr Haematoxyline (5B-535³) oplossen in 75ml verwarmde AD.

Zodra de vloeistoffen  tot kamertemperatuur zijn afgekoeld dan: oplossing A, onder constant roeren, vermengen met oplossing B (niet omgekeerd). De oplossing kleurt eerst bruin, dan blauw en vervolgens donker violet.
Het mengsel vervolgens verwarmen totdat het weer  bruin is geworden. Wordt de oplossing olijfgroen dan is er te veel geoxideerd. Reductie geschiedt door druppelsgewijs een oxaalzuur-(3G-068³)oplossing van 10% in de warme oplossing te druppelen totdat de kleur weer bruin is geworden. Na afkoeling moet  de oplossing zuur reageren. Eventueel met oxaalzuur aanzuren.


26. Eosine waterig²

- 1gr Eosine (1B-425³) oplossen in 100ml verwarmde AD;
- na afkoeling filtreren.


27. Eosine alcoholisch²

- 1gr Eosine BA (1B-421³) oplossen in 70ml methylalcohol (3E-158³) en 30ml AD;


28. Eosine-methyleenbauw volgens May-Grünwald² (Bloedkleuring)  

- 0,25gr Eosine-methyleenblauw (1A-172³) oplossen in 100ml verwarmde methylalcohol (3E-158³) op 60°C;
- na afkoeling filtreren door een droog filter in een droge fles;
- de oplossing  is goed houdbaar.

Om een standaard kleuring te waarborgen is het beter een industrieel aangemaakte oplossing aan te schaffen.
Bij Chroma is dit: 2E-008


29. Eosine-methyleenbauw  volgens Wright² (Bloedkleuring)

- 0,2gr Eosine-methyleenblauw (1A-324³) oplossen in 100ml verwarmde methylalcohol (3E-158³) op 60°C;
- na afkoeling filtreren door een droog filter in een droge fles;
- de oplossing is  goed houdbaar maar dient niet in de buurt te staan van zure oplossingen.

Om een standaard kleuring te waarborgen is het beter een industrieel aangemaakte oplossing aan te schaffen.
Bij Chroma is dit: 2E-036


30. Gentiaanviolet volgens Flemming² (Gram)

- 1gr Gentiaanviolet (1B-411³) oplossen in 20ml methylalcohol (3E-158³) en 80ml AD.


31. Fuchsine basisch waterig²  

- 1gr Fuchsine (1A-308³) door verwarmen oplossen in 20ml ethanol en 80ml AD;
- na afkoeling filtreren.


32. Fuchsine  basisch alcoholisch²

- 3gr Fuchsine (1A-308³) door verwarmen oplossen in 80ml ethanol en 20ml AD;
- na afkoeling filtreren.


33. Fuchsine zuur¹

- 1gr Fuchsine (1B-525³) door verwarmen oplossen in 99ml AD;
- na afkoeling filtreren.


34. Fuchsine ponceau¹ (Trichroom volgens Goldner)  

- 0,2gr Ponceau de Xylidine (1B-207³) en 0,6gr fuchsine zuur (1B-525³) oplossen in 300ml AD;
- 0,6ml IJsazijn (3D-087³) toevoegen.


35. Gallocyanine-Chroomaluin volgens Einarson¹ (DNS, RNS, mestcellen, 'Nissl' substantie et cetera)

- 5gr Chroomaluin (3G-103³) oplossen in 100ml AD;
- 0,15gr Gallocyanine (1A-204³) toevoegen  en al roerend laten koken. De bij kamertemperatuur moeilijk oplosbare kleurstof lost op in een diepblauwe kleur;
- 5min laten rusten (niet langer);
- na afkoeling filtreren en met AD tot 100ml aanvullen;
- de PH waarde moet rond de 1,65  zijn.


36. Gallocyanine-Chroomaluin volgens Einarson² (DNS, RNS, mestcellen 'Nissl' substantie et cetera)

- 5gr Gallocyanine-chroomaluin (1A-458³) toevoegen aan 100ml AD en al roerend laten koken;
- na afkoeling  filtreren.


37. Gentiaanviolet-Orange G²

- 1,5gr Gentiaanviolet-orange G (1F-269³) onder lichte opwarming oplossen in 100ml ethanol;
- na  afkoeling filtreren.


38. van Gieson kleuroplossing¹ (Bindweefsel, overzichtskleuring)  

A, stamoplossing;
- 500ml Verzadigde picrinezuuroplossing (3E-086³);
- 0,5gr Zure fuchsine (1B-525³) oplossen in 25ml AD;
- de picrinezuuroplossing filtreren en met de 25ml fuchsine  mengen;
- deze stamoplossing is onbegrensd houdbaar.

B, gebruiksoplossing;
- op 100ml stamoplossing 1ml ijsazijn (3D-087³) van 1% toevoegen.


39. van Gieson kleuroplossing² (Bindweefsel, overzichtskleuring)

- 1gr Picrofuchsine (1A-488³) door koken in 100ml AD oplossen.


40. Haemaluin zuur volgens Mayer¹ (Kernkleuring voor bijv. HE kleuring)

- 1 gr Haematoxyline (5B-535³) oplossen in 1000ml AD;
- 200gr Natriumjodaat NaJO₃ (3G-061³) toevoegen en oplossen;
- 50gr Kalialuin (3G-029³) toevoegen en oplossen. De oplossing kleurt blauwviolet;
- 50gr Chloralhydraat  (3G-102³) en 1gr citroenzuur (3G-087³) toevoegen en mengen;
- de oplossing kleurt nu roodviolet.

De oplossing is onmiddellijk gebruiksgereed en is in goed gesloten fles langere tijd stabiel.


41. Haemaluin zuur volgens  Mayer² (Kernkleuring voor bijv. HE kleuring)  

- 10gr Haemaluin (1A-528³) door verwarmen oplossen in 100ml AD;
- na afkoeling filtreren.


42. Haemaluin  volgens Mayer² (Kernkleuring voor bijv. HE kleuring)

- 5gr Haemaluin (1A-552³) door koken oplossen in 100ml AD;
- na afkoeling filtreren.


43. Haematoxyline  volgens Delafield² (Kernkleuring voor bijv. HE kleuring)

- 2 gr Haematoxyline (1A-368³) door verwarmen oplossen in 70ml AD;
- 15 ml methylalcohol (3E-158³)en 15ml glycerine (3D-086³) toevoegen;
- na afkoelen filtreren.


44. Haematoxyline volgens Ehrlich¹ (Kernkleuring voor bijv. HE kleuring)

- 2 gr Haematoxyline (5B-535³) door verwarmen oplossen in 100ml ethanol  96%;
- 3gr Kalialuin (3G-029³) door koken in 100ml AD oplossen;
- in de nog warme aluinoplossing 100ml glycerine (3D-086³) mengen;
- de haematoxylineoplossing in kleine porties in de aluinoplossing mengen;
- 10ml ijsazijn (3D-087³)  toevoegen.

De kleuroplossing in een donkere open fles (afdekken met een stuk filterpapier) minstens 2 weken laten rijpen. Geregeld omschudden. De oplossing is lang houdbaar.
Wil men niet wachten op de rijping dan kan door toevoeging van  een oxidatiemiddel de kleurstof direct gebruiksgereed gemaakt worden. Op 1gr haematoxyline 0,2gr natriumjodaat NaJO₃ (3G-061³) toevoegen.
Deze haematoxyline geeft een zeer krachtige donkerblauwe kernkleuring. Door de ijsazijn wordt het  gevaar van overkleuring sterk verminderd en, ook door de glycerine, de houdbaarheid vergroot.


45. Haematoxyline volgens Ehrlich² (Kernkleuring voor bijv. HE kleuring)  

- 2 gr Haematoxyline (1A-508³) door koken oplossen in 40ml AD, 20ml ethanol 96% en 40ml glycerine (3D-086³);
- na het koken 5ml ijsazijn (3D-087³) toevoegen;
- na afkoeling filtreren.


46. IJzerhaematoxyline volgens Heidenhains¹ (Kernkleuring voor bijv. van Gieson)

A;
- 10gr IJzeraluin (= ammonium-IJzer(III)-sulfaat)  (3G-095³) in 100ml AD zonder verwarmen oplossen;

B;
- 0,5gr Haematoxyline (5B-535³) oplossen in 10ml ethanol 96% en verdunnen met 90ml AD;
- deze oplossing 4-5 weken in een open fles laten rijpen.

Oplossing 'B' voor  gebruik 1:1 verdunnen met AD. De kleuroplossing kan meerdere keren gebruikt worden en wordt zelfs na langere tijd beter.
Kunstmatige rijping door toevoeging van een oxidatiemiddel is mogelijk. Op 0,5gr haematoxyline 98,5mgr natriumjodaat NaJO₃ (3G-061³) toevoegen.


47. Jodide-kaliumjodide² (Lugol)

- 2gr Kaliumjodide (3L-005³) oplossen in 5ml AD;
- 1gr jodium (3L-004³) toevoegen  dat zich in een paar minuten op zal lossen;
- aanvullen met AD tot 300ml.


48. Kernechtrood-aluminiumsulfaat¹ (Kernkleuring)  

- 5gr Aluminiumsulfaat (3G-092³) oplossen in 100ml AD;
- de aluminiumsulfaatoplossing verwarmen en 0,1gr kernechtrood (1A-402³) oplossen;
- na afkoeling filtreren.


49. Kernechtrood-aluminiumsulfaat ² (Kernkleuring)

- 5,2gr Kernechtrood-aluminiumsulfaat (1A-466³) door verwarmen oplossen in 95ml AD;
- na afkoeling filtreren.


50. Kernechtrubin² (Kernkleuring)

- 0,1gr Kernechtrubin (1A-268³) zonder verwarmen oplossen in 100ml AD;
- na oplossen 1 ml ijsazijn (3D-087³) toevoegen.


51. Lithiumkarmijn volgens  Orth¹

- 1gr Lithiumcarbonaat (3G-043³) oplossen in 100ml AD (levert een verzadigde oplossing);
- vlak voor gebruik de oplossing filtreren;
- 2,5gr Karmijn (5A-380³) aan de oplossing toevoegen en 5-10min koken;
- na  afkoeling filtreren.
Ten behoeve van de houdbaarheid 1 thymol (3L-013³) toevoegen.


52. Lithiumkarmijn volgens Orth²  

- 2,5gr Lithiumkarmijn (1A-386³) oplossen door koken in 100ml AD;
- na afkoeling filtreren 2x (de oplossing moet helder zijn);
Ten behoeve van de houdbaarheid 1 thymol (3L-013³) toevoegen.


53. Mallory's trichroom¹

- zie recept 3 of 4


54. Methyleenblauw waterig ² (kernkleuring)

- 2gr Methyleenblauw (1B-429³) oplossen door verwarmen in 10ml ethanol en 90ml AD;
- na afkoeling filtreren.


55. Methyleenblauw  alcoholisch² (kernkleuring)

- 3gr Methyleenblauw (1B-429³) oplossen door verwarmen in 80ml ethanol en 20ml AD;
- na afkoeling filtreren.


56. Methylgroen-pyronine  volgens Pappenheim² (DNS, groen en RNS, rood)  

- 1gr Methylgroen-pyronine (1A-560³) oplossen door verwarmen in 100ml AD en 5ml ethanol;
- na afkoeling filtreren.

Vlak voor de kleuring de kleurstof 1:1 mengen met natriumacetaat mat  PH 4.8⁴


57. Natriumacetaat  buffer volgens Walpole¹

A;
- 8,2gr Natriumacetaat (3G-052³) oplossen in 1000ml AD.

B;
- 5,8ml ijsazijn (3D-087³) oplossen in 1000ml AD.

Meng volgens onderstaande tabel in ml:

PH  

Oplossing A

Oplossing B

3,6

15

185

3,8

24

176

4,0

36

164

4,2

53

147

4,4

74

126

4,6

98

102

4,8

120

80

5,0

141

59

5,2

158

42

5,4

171

29

5,6

181

19

 



58. Methylviolet  waterig
²  

- 2gr Methylviolet (1B-417³) door verwarming oplossen in 100ml AD;
- na afkoeling filtreren.


59. Methylviolet alcoholisch²

- 2gr Methylviolet (1B-415³) oplossen in 70ml ethanol en 30ml AD;
- filtreren.


60. Picrine-blauwzwart volgens Heidenhain¹ (basaalmembranen)

- 0,25gr  Blauwzwart B (1F-239³) oplossen in 100ml picrinezuur (3E-086³);
- 20ml methylalcohol (3E-158³) toevoegen en daarna 80ml AD.
De kleurstof is onbegrensd houdbaar. Voor kleuring 1:1 met AD verdunnen.


61. Picro-indigokarmijn volgens Mayer¹

- 0,25gr Indigokarmijn (1A-162³) oplossen in 70ml picrinezuur (3E-086³).


62. Resorcinfuchsine volgens Weigert¹ (elastische vezels)  

A;
- 0,5gr Fuchsine basisch (1A-308³) en 1gr resorcin (3G-072³) door verwarmen oplossen in 50ml AD.

B;
- 2gr IJzer (III) chloride (3L-003³) oplossen 10ml AD.

- oplossing  A aan de kook brengen;
- oplossing B toevoegen en opnieuw laten koken (5min), regelmatig roeren;
- na afkoeling filtreren;
- filter en filtraat in een kolf opvangen en 70-100ml ethanol 96% toevoegen;
- kolf verhitten tot aan kookpunt,  het filtraat lost nu op;
- na afkoeling 0,7ml geconcentreerde zoutzuur (3L-012³) HCL toevoegen;
- filtreren.
De kleuroplossing is enkele maanden houdbaar.


63. Resorcinfuchsine volgens Weigert² (elastische vezels)

- 1gr Resorcin-fuchsine (1A-294³) door koken oplossen in 100ml ethanol 96% en 3ml zoutzuur (3L-012³);
- na afkoeling filtreren.


64. Safranine waterig
² (kernkleuring)

- 1gr Safranine (1B-463³) door koken oplossen in 10ml ethanol 96% en 90ml AD;
- na afkoeling filtreren.


65. Safranine alcoholisch ² (kernkleuring)

- 2gr Safranine (1B-477³) door verwarmen oplossen in 100ml ethanol 96%;
- na afkoeling filtreren.


66. Zoutzure alcohol 3%²

- 3ml zoutzuur 25% (3L-012³)mengen met 100ml ethanol 70%.


67. Schiff's reagens¹

- 0,5gr Pararosaniline (1B-297³) oplossen in 15ml 1N HCL;
- 0,5gr  natriumbisulfiet (3G-055³) oplossen in 85ml AD;
- beide oplossingen vermengen en 24 uur laten rijpen;
- bij een licht geelkleuring 0,3gr active kool toevoegen en filteren;
- Is de oplossing nog rood, dan iets natriumbisulfiet toevoegen.


68. Olierood¹ (vetkleuring bij coupe van vriesmicrotoom)  

A, stamoplossing
- 0,5gr Olierood O (1E-242³) oplossen in 100ml isopropanol 99% (3D-085³).
(In plaats van olierood O kan ook vetrood 7B (1A-272³) worden gebruikt)

B, gebruiksoplossing
- 6 delen van oplossing A mengen met 4 delen AD;
- 24 uur laten staan;
- filtreren. Mocht de oplossing niet direct gebruikt worden dan moet na enige tijd opnieuw gefiltreerd worden.


69. Trypaanblauw¹ (testkleuring voor levende en dode cellen)

A;
- 0,5gr Trypaanblauw (1B-187³) oplossen in 100ml AD.

B;
- 0,9gr keukenzout oplossen in 100ml AD.

A en B mengen 1:1

Cellen die dood of beschadigd zijn kleuren blauw, intacte levende cellen worden niet gekleurd


70. Janusgroen¹ (kleuring van mitochondriën bij levende cellen)

- 0,05gr Janusgroen (1A-156³) oplossen in 100ml Ringer's fysiologische zoutoplossing (zie recept 71).

10-20min kleuren in een vochtige kamer. Mitochondriën kleuren diep blauwgroen of groen. Mislukt de kleuring dan verder verdunnen.


71. Ringer's fysiologische zoutoplossing (bestemd voor zoogdieren: J.A. Schraag (1972), Handboek voor het onderwijs in de praktische biologie,  uitgever: Muusses te Purmerend. ISBN: 9789063080396)

- 0,3gr  Calciumchloride (3G-101³), 0,25gr kaliumchloride en 8,5gr natriumchloride (3E-162³) oplossen in 1000ml AD.


72. Methyleenblauw-Azur II¹ (bestemd voor waterige preparaten waar paraplast/paraffine is verwijderd)

A;
- 1gr Methyleenblauw (1B-429³) door verwarmen oplossen in 100ml AD;
- na afkoeling filtreren.

B;
- 1gr Azur II (1A-284³) door verwarmen  oplossen in 100ml AD;
- na afkoeling filtreren.

A en B mengen 1:1

Omdat deze kleurstoffen snel in alcoholische oplossingen uitspoelen (dehydratie) moet deze na het kleuren voor meerdere uren worden gefixeerd met een 5% waterige ammoniummolybdaat (3G-005³) oplossing¹ (pagina 194).


73. Pyronine-Toluidineblauw¹ (bestemd voor waterige preparaten waar paraplast/paraffine is verwijderd)

A;
- 1gr Toluidineblauw O (1B-481³) door verwarmen oplossen in 100ml AD;  
- na afkoeling filtreren.

B;
- 1gr Pyronine (1B-397³) door verwarmen oplossen in 100ml AD;
- na afkoeling filtreren.

Voor kleuring 4 delen A met 1 deel B mengen.

Omdat  deze kleurstoffen snel in alcoholische oplossingen uitspoelen (dehydratie) moet deze na het kleuren voor meerdere uren worden gefixeerd met een 5% waterige ammoniummolybdaat (3G-005³) oplossing¹ (pagina 194).


74. Levanol¹ (myeline kleuring in zenuwweefsel)

- 2gr Levanol Fast Cyanine 5RN (1E-232³) oplossen in 90ml methanol (3E-158³);
- een nacht laten staan;
- voor gebruik 10ml ijsazijn (3D-087³) toevoegen;
- de  verzadigde oplossing niet filtreren.

Kleurprotocol¹ (blz 596):
- zenuwweefsel in formaline fixeren en in paraplast brengen;
- coupes in waterige omgeving brengen;
- 5min kleuren in kernechtrood-aluminiumsulfaat (1A-466³) 0,5%;
- spoelen met AD;
- 5min beitsen  met waterig fosforwolfraamzuur (3D-092³) 1%;
- spoelen met AD;
- 2-3min spoelen in methanol (3E-158³);
- 5min kleuren in levanol (1E-232³);
- differentiëren in drie porties methanol-ijsazijn 9:1;
- 3min methanol;
- 3min xylol (3D-075³);
- indekken in euparal (3C-239³) of malinol (3C-242³).

Myeline kleurt krachtig blauw (kleurcontrast is sterker dan met luxol fast blue). Kleuring is alleen geschikt voor het centrale zenuwstelsel. Bij perifere zenuwen wordt ander soort weefsel te veel meegekleurd.


75. Orange G-eosine Y¹ (kleuring volgens Mann-Dominici)  

- 0,2gr Erythrosine Y (1A-336³) of 0,5gr eosine Y (1B-427³) en 0,6gr Orange G (1B-221³) op in 100ml AD;
- aanzuren met 1 druppel ijsazijn.


76. Safranine-Gentiaanviolet-Orange G² (Chromosomen, spoelfiguren en centriolen volgens Flemming)

- 0,5gr Safranine (1B-463³) oplossen in 20ml methanol (3E-158³), 80ml AD en 1ml aniline (3D-093³).
- 1gr Gentiaanviolet (1B-411³) oplossen in 20ml methanol (3E-158³) en 80ml AD.
- 0,5gr Orange G (1B-221³) door verwarmen oplossen in 90ml AD en 10ml methanol (3E-158³);
- de Orange G oplossing na afkoeling filtreren. Voor kleuring  verdunnen met AD 1:10.

Weefsel moet gefixeerd zijn in Chroom-Osmium-IJsazijn (3D-015³) (Flemming). Bij paraffine blokken die reeds jaren bewaard zijn moet op preparaatniveau alsnog 24uur worden gechromeerd met Flemmingse vloeistof om de kleurbaarheid te herstellen. Zie Oplossingen voor een recept voor dit fixatief.


77. Zivernitraat ¹
(Zilverimpregnatie volgens Servier-Munger, modificatie van Bielschowsky. Rom. 17, pag 590, par 1.2.5.3.9)

- 20gr Zilvernitraat (3F-083³) oplossen in 50ml AD, vervolgens met AD aanvullen tot 100ml.

Geen metalen gereedschappen gebruiken en alle glaswerk moet zeer goed schoon zijn.


78. Zilverammoniak oplossing¹
(Zilverimpregnatie volgens Servier-Munger, modificatie van Bielschowsky Rom. 17, pag 590, par 1.2.5.3.9)

A;
- 10gr Zilvernitraat  (3F-083³) oplossen in 30ml AD, vervolgens met AD aanvullen tot 50ml;
- Ammoniak in druppels toevoegen totdat bruine neerslag net verdwenen is (na elke druppel het effect afwachten).

B;
- 8gr Natriumkarbonaat (Soda) oplossen in 30ml  AD.

C;
- 0,5ml van oplossing B toevoegen aan oplossing A.

D;
- 25dr Ammaniak toevoegen aan oplossing C en goed mengen (oplossing moet helder zijn).

E;
- 2ml Formol 37% (3D-084³) toevoegen aan 98ml AD.  

F, gebruiksoplossing;
- 10dr van E onder constant schudden toevoegen aan de zilverammoniakoplossing (A-D);
- de verkregen oplossing onmiddellijk uitgieten over de gereedliggende preparaten.

Geen metalen gereedschappen gebruiken en alle glaswerk moet zeer goed schoon zijn.
Glaswerk met zilverammoniakresten onmiddellijk reinigen (opgedroogde resten kunnen spontaan exploderen¹, pag 509)


 

Back     Top

 
Terug naar de inhoud | Terug naar het hoofdmenu